מֵידָע

מהי המשמעות של אופסוניזציה?


ויקיפדיה אומרת

אופסוניזציה של נוגדנים היא התהליך שבו מסומן פתוגן לבליעה ומסולק על ידי פגוציט. אופסוניזציה כוללת כריכה של אופסונין, למשל, נוגדן, לאפיטופ על אנטיגן. לאחר שאופסונין נקשר לקרום, הפגוציטים נמשכים אל הפתוגן.

אך מדוע יש צורך שהפתוגן נקשר לאופסונין? האם הפגוציטים לא יכולים להימשך לפתוגן ללא אופסוניזציה? פשוט אני רוצה לדעת מה המשמעות של אופסוניזציה?


נטרול נוגדן

א נטרול נוגדן (NAb) הוא נוגדן המגן על תא מפני פתוגן או חלקיק זיהומי על ידי נטרול כל השפעה שיש לו ביולוגית. נטרול הופך את החלקיק לבלתי מדבק או פתוגני יותר. [3] נוגדנים נטרוליים הם חלק מהתגובה ההומורלית של מערכת החיסון ההסתגלותית נגד וירוסים, חיידקים תוך -תאיים ורעלן מיקרוביאלי. על ידי התחברות ספציפית למבני שטח (אנטיגן) על חלקיק זיהומי, נוגדנים מנטרלים מונעים מהחלקיק אינטראקציה עם תאי המארח שלו שהוא עלול להדביק ולהרוס. חסינות עקב נטרול נוגדנים ידועה גם בשם עיקור חסינות, מכיוון שמערכת החיסון מבטלת את החלקיק המדבק לפני כל זיהום. [4]


תוכן

המולקולה מורכבת מ -20 מודולי חלבון בקרת משלים (CCP) (המכונים גם חזרות קונצנזוס קצרות או תחומי סושי) המחוברים זה לזה באמצעות קישורים קצרים (של בין שלושה לשמונה שאריות חומצות אמינו) ומסודרים בראש מורחב עד אופנת זנב. כל אחד ממודולי ה- CCP מורכב מכ- 60 חומצות אמינו עם ארבע שאריות ציסטאין דיסולפיד המחוברות בסידור 1-3 2-4, וליבה הידרופובית הבנויה סביב שאריות טריפטופן כמעט בלתי משתנות. המודולים של המק"ס ממוספרים בין 1-20 (ממסוף N של החלבון) מק"ס 1-4 ומקדמים 19-20 עוסקים ב- C3b בעוד שמק"מים 7 ו -1920 נקשרים ל- GAG ולחומצה סיאלית. [11] עד כה נקבעו מבנים אטומיים עבור מק"ס 1-3, [12] מק"ס 5, [13] מק"ס 7, [14] מק"ס 10-11 ומק"ס 11-12, [15] מק"ס 12-13, [ 16] CCP 15, CCP 16, [17] CCPs 15–16, [18] CCPs 18–20, [19] ו- CCPs 19–20. [20] [21] המבנה האטומי עבור מק"ס 6-8 הקשור ל- GAG מחקה אוקטסולפט סוכרוז, [22] מק"ס 1-4 במתחם עם C3b [23] ו CCPs 19–20 במתחם עם C3d (המתאים ל- תחום thioster של C3b) [24] [25] נקבעו גם הם. למרות שטרם נקבע מבנה רזולוציה אטומית עבור גורם H שלם, טכניקות ברזולוציה נמוכה מצביעות על כך שהוא עשוי להיות כפוף לאחור בתמיסה. [26] מידע זמין עד היום מצביע על כך שמודולי CCP 1-4 אחראים לפעילות האצת הקופקטור והריקבון של גורם H, ואילו אפליה עצמית/לא-עצמית מתרחשת בעיקר באמצעות קישור GAG למודולי CCP 7 ו/או GAG או חומצה סיאלית. מחייב ל- 19–20. [26] [27]

בשל התפקיד המרכזי שמשפיע גורם H בוויסות המשלים, ישנן מספר השלכות קליניות הנובעות מפעילות גורמת H החריגה. גורם יתר H עלול לגרום להפחתת פעילות המשלים על תאים פתוגניים - הגברת הרגישות לזיהומים מיקרוביאליים. גורם H תת -פעיל עלול לגרום לפעילות משלימה מוגברת בתאי מארח בריאים - וכתוצאה מכך למחלות אוטואימוניות. על כן, אין זה מפתיע שמוטציות נדירות או פולימורפיזמים בודדים של נוקלאוטיד יחיד (SNP) בגן גורם המשלים H (CFH) גורמים לרוב לפתולוגיות. יתר על כן, הפעילות המעכבת משלים של גורם H, ורגולטורי משלים אחרים, משמשות לעתים קרובות פתוגנים להגברת האלימות.

ניוון מקולרי הקשור לגיל ערוך

בשנת 2005, כמה קבוצות מחקר עצמאיות זיהו SNP ב- CFH, מה שמביא לשינוי החלבון p.Y402H, כגורם סיכון ל- AMD הקיים אצל כשליש מהאירופאים. [28] למרות שתדירות האלל משתנה במידה ניכרת בין אוכלוסיות שונות, Y402H נקשר בעקביות עם הופעת AMD והתקדמותו. [28] לאנשים הומוזיגוטים יש סיכוי גבוה יותר לשבעה פעמים לקשר עם AMD ואילו לטרוזיגוטים יש סיכוי גבוה יותר פי שניים עד שלושה לקשר עם המחלה. [28] SNP זה, הממוקם במודול CCP 7 של גורם H, הוכח כמשפיע על יכולתו של חלבון גורם H להתמקם לאתרי דלקת ברקמות הרשתית (למשל על ידי פוליאניונים ופנטראקסינים) ולווסת את הפעלת המשלים וה תאי חיסון. [28] הוכח כי ה- SNP משפיע גם על תפקודו של חלבון 1 דמוי גורם H, גרסה מחולקת לחלופין של גורם H המורכבת מ- CCPs 1 עד 7 בלבד, הנחשבת כבעלת תפקיד גדול יותר בוויסות המשלים תוך עיני. [28] עם זאת, הווריאנטים הגנטיים ב- CFH עם ההשפעה הגדולה ביותר על הסיכון של הפרט ל- AMD הוכחו כמשפיעים על מק"ס 1 עד 4, המעורבים בהרגעת ההשפעות של מסלול החלופה של המשלים. [28] שינוי קידוד תפקודי נדיר, p.R1210C, ב- CFH גורם לחסר תפקודי בגורם H ומוביל לסיכון גבוה משמעותית לניוון מקולרי כמו גם לתנאי כליות בתיווך משלים. [28] [29]

שונות בגנים אחרים של הרגולטורים של מוקד הפעלת המשלים, כגון גנים הקשורים לגורם משלים H, כמו גם בחלבוני משלים אחרים (למשל גורם I, C2/גורם B ו- C3) נקשרו גם הם לסיכון גבוה יותר ל- AMD. [28] התיאוריה הנוכחית היא כי חוסר ויסות של השלמה הוא גורם מפתח לדלקת כרונית ב- AMD. [28]

תסמונת אורמית המוליטית לא טיפוסית עריכה

תסמונת אורמית המוליטית (HUS) היא מחלה הקשורה לאנמיה המוליטית מיקרואנגיופתית, טרומבוציטופניה ואי ספיקת כליות חריפה. ניתן לרכוש אותו (למשל בעקבות זיהום ב- shigatoxigenic Escherichia coli), או לעבור בתורשה (המכונה גם תסמונת אורמית המוליטית לא טיפוסית, aHUS). aHUS נקשר חזק למוטציות בגנים של מערכת המשלים, במיוחד גורם H. [28] בניגוד ל- AMD ו- C3 גלומרולופתיה (עוד הפרעה כלייתית בתיווך משלים) הקשורים בעיקר לשונות במסוף ה- N (CCPs 1 עד 4), מוטציות קדומות בגורם H משפיעות בעיקר על מסוף C של החלבון (מודולי CCP 19 ו -20), [28] אשר הוכח כי הוא אחראי להיצמדות לרקמות הכליות ולוויסות רכיבי המשלים ולמורדם במורד הזרם. אפקטורים. [28] [30] [31]

סכיזופרניה עריכה

שינויים בתגובה החיסונית מעורבים בפתוגנזה של הפרעות נוירופסיכיאטריות רבות, כולל סכיזופרניה. מחקרים אחרונים הצביעו על שינויים במערכת המשלים, כולל אלה שעלולים לגרום להפעלת יתר של מסלול המשלים האלטרנטיבי, עלולים לגרום לסכיזופרניה. לדוגמה, ה- CFH SNP rs424535 (2783-526T & gtA) היה קשור באופן חיובי לסכיזופרניה. [32]

שבץ איסכמי ערוך

נמצא כי rs800292 (184G & gtA) SNP נקשר באופן חיובי לשבץ ואלל קטין של rs800912 של הגן CFH עשוי להיחשב כגורם סיכון לשבץ איסכמי. [32]

גיוס על ידי פתוגנים עריכה

בהתחשב בתפקידו המרכזי של גורם H בהגנה על התאים מפני השלמה, אין זה מפתיע שכמה פתוגנים אנושיים חשובים פיתחו מנגנונים לגיוס גורם ח. פתוגנים שהוכחו כמגייסים גורם H כוללים: Aspergillus spp. Borrelia burgdorferi B. duttonii B. recurrentis Candida albicans [33] Francisella tularensis Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis Streptococcus Pneumoniae [8] ו- Streptococcus pyogenes. החיידק הגראם שלילי B.burgdorferi מכיל חמישה חלבוני מחייב פקטור H: CRASP-1, CRASP-2, CRASP-3, CRASP-4 ו- CRASP-5. [34] כל חלבון CRASP קושר גם פלסמינוגן. [34] ייתכן שתדירות האלל של גרסאות CFH ברחבי העולם משקפת לחץ סלקטיבי ממחלות זיהומיות. [28]

גורם H הוכח כאינטראקציה עם רכיב משלים 3, בין חלבוני משלים וגורמים נוספים, מה שמוביל לוויסות המסלול החלופי של המשלים בפרט. [28] [35] [36]

גורם H הפעיל ביולוגית הופק על ידי ראלף רסקי ועמיתיו בביו -כור האזוב, [37] בתהליך שנקרא חקלאות מולקולרית. כמויות גדולות של פקטור H פעיל ביולוגי, המתאימות למטרות טיפוליות, הופקו באמצעות גן מותאם לקודון סינתטי המתבטא במארח ביטוי השמרים, פיצ'יה פסטוריס. [38]

ניוון מקולרי הקשור לגיל ערוך

ג'מיני תרפויטיקס בע"מ הינה חברה לרפואת דיוק מבוססת מסצ'וסטס המתמקדת בפיתוח טיפולים חדשים באמצעות הבנה מעמיקה יותר של מחלות. בהתבסס על הפעילות הביולוגית של גורם H, ג'מיני מפתחת חלבון גורם אנושי רקומביננטי H H, GEM103, לטיפול ב- AMD יבש. תאומים הודיעה לאחרונה על השלמת ההרשמה לניסוי שלב 2a של GEM103 בניוון מקולרי הקשור לגיל יבש (AMD) בחולים עם וריאנטים גנטיים בסיכון גבוה. נתוני הקו העליון צפויים בשנת 1H 2021.


תת-סוגים של IgG

אם אתה רוצה לקבל מידע מעמיק על תת-כיתות IgG אתה יכול לקרוא גם על תת-סוגים של IgG. מבנה כללי של ארבע תת -סוגים של נוגדן IgG (מקור: Kuby Immunology)

ארבע כיתות משנה של IgG אנושי שונות במבנה שלהן מכיוון שהן מקודדות על ידי גנים שונים מסוג CH נבטים. הם שונים בגודל אזור הצירים ובמספר וסידורי הקשרים הדו -סולפידיים בין שרשרת המקשרים בין השרשראות הכבדות שלהם. תכונה בולטת של IgG3 אנושי היא 11 קשרי הדיסולפיד הבין -שרשרת שלה.


בַּמַבחֵנָה הערכה של המשמעות האימונולוגית של נוגדן חד שבטי אנושי המופנה לשפעת גרעין נוקלאופרוטאין

נגיפי שפעת A גורמים למגיפות שנתיות ולעתים למגיפות. נוגדנים המופנים אל נוקלאופרוטאין הנגיפי המשומר (NP) עשויים למלא תפקיד בחסינות מפני תת סוגי וירוס A שפעת. כאן, הערכנו את המשמעות האימונולוגית של נוגדן חד -שבטי אנושי המופנה ל- NP בַּמַבחֵנָה. נוגדן זה נקשר לתאים הנגועים בנגיף אך לא הציג פעילות מנטרלת וירוסים, ציטוטוקסיות של תאים תלויי משלים או אופסוניזציה של אנטיגן נגיפי לשיפור הצגת האנטיגן לתאי CD8 + T על ידי תאים דנדריטים.

נגיפי שפעת A גורמים למגיפות, מדביקים מיליוני אנשים ברחבי העולם וגורמים ל -250,000 עד 500,000 מקרי מוות מדי שנה (1). בנוסף למגיפות שנתיות, נגיפי שפעת A גורמים מדי פעם למגיפות. לאחרונה נגרמה מגיפה מנגיף השפעת A (H1N1) pdm09, שמקורו בחזירים. מגיפה זו והתפוצה מתמשכת של וירוסים אחרים שפעת A מסוג H5N1, H7N7, H7N9, H3N2v ו- H9N2 הדגישו את חשיבות הפיתוח של חיסונים הגורמים לחסינות מפני תת סוגים שונים של וירוס שפעת A, מה שנקרא heterosubtypic חֲסִינוּת. הנוכחות של חסינות הטרו -סובטיפטית הודגמה בבני אדם ובמודלים של בעלי חיים שונים, אך הידע שלנו על זרועות המערכת החיסונית והמטרות הנגיפיות שלהן התורמות לחסינות הטרוס -סובטיפית עדיין אינו שלם (2 𠄶). מחקרים שנעשו במודלים של בעלי חיים הראו שתאי T ספציפיים לנגיפים תורמים לחסינות הטרוס-סובטיפטית מכיוון שהם מסוגלים לזהות אפיטופים שמורים הקיימים בחלבונים הפנימיים של וירוס שפעת A (6 𠄹). בנוסף, נוגדנים כנגד התחום החוץ -תאי של חלבון המטריצה ​​2 (M2e) ואזור הגבעול של המגלוטינין תורמים לחסינות הטרו -סובטיפית (10 �).

תפקידם של נוגדנים לנוקליאופרוטאין נגיף שפעת A (NP) בחסינות הטרוסובטיפטית אינו ידוע במידה רבה, אם כי מחקרים בעכברים מצביעים על כך שהם יכולים להרשות לעצמם מידה מסוימת של הגנה (13, 14). לפני יותר משני עשורים, הוכח כי נוגדנים חד שבטיים ספציפיים ל- NP (MoAbs) הצליחו להיקשר לתאים הנגועים בנגיף, מה שמרמז כי NP ויראלי קיים על פני התא (15). יתר על כן, ההגנה מפני זיהום שנצפתה בעכברים הקשורים לנוגדני IgG ספציפיים ל- NP מתואמים עם פינוי ויראלי מואץ וכללו קולטני Fc ותאי CD8 + (13, 14). למרות שנבדקים אנושיים עם היסטוריה של זיהום בנגיף שפעת, כולם מפתחים נוגדנים ספציפיים לנגיף שפעת A וייצור נוגדן חד-שבטי אנושי כנגד נגיף השפעת A תואר לפני עשרות שנים (16, 17), כרגע לא ידוע אם אלה לנוגדנים יש משמעות אימונולוגית ומעניקים כל חסינות צולבת בבני אדם.

במאמר הנוכחי, הערכנו את הפעילות הביולוגית של נוגדן חד-שבטי אנושי ספציפי לנגיף שפעת A. בַּמַבחֵנָה. שיטות המשמשות להשגת ובחירת הנוגדן החד-שבטי הספציפי לאדם NP (D1-11 MoAb NP) תוארו בעבר (18). מחקר זה אושר מראש על ידי לוחות הבדיקה המוסדיים של בית הספר לרפואה באוניברסיטת אמורי והקרן למחקר רפואי באוקלהומה (18). בקיצור, דם נאסף מאדם בריא 7 ימים לאחר החיסון בחיסון נגד שפעת עונתית ותאים בודדים המפרישים נוגדנים מסוג IgG +. לאחר מכן, שעתוק הפוך-PCR (RT-PCR) בוצע על תמלילי VחDJח ו- V.κJκ גנים של תאים ממוינים אלה, ולאחר הגברה באמצעות PCR ספציפי, VחDJח ו- V.κJגנים κ שוכנו לתוך וקטורי ביטוי המכילים IgG אנושי קבוע (C.γ1) או Ig κ (Cκ) אזורים. פלסמידים של הגנים הכבדים והקלים הועברו בצינורות לתאים 293T בשיטת משקעים של סידן פוספט, ונוגדנים המופרשים בתת -תגלית טוהרו בעיקר כפי שתואר לעיל (18, 19). טוהר ה- MoAb NP נבדק על ידי SDS-PAGE (נתונים לא מוצגים), וריכוז החלבון נקבע באמצעות ערכת assay חלבון ביצינצ'ונינית (BCA) (Thermo Fisher Scientific Pierce Protein Biology Products, Rockford, IL). לאחר מכן, הספציפיות של הנוגדן לשפעת A נגיף A אושרה על ידי הוראות היצרן. בקצרה, MoAb מטוהר היה מדולל 10 פעמים במאגר וזמינות והועבר לבארות של צלחת 96-באר מצופה בשפעת A של נגיף A. לאחר הדגירה במשך שעה אחת, שלבי כביסה שונים ודגירה עם נגיף אנטי שפעת, פרוקסידאז חזרת ו- 3,3 ′,5,5 ′-tetramethylbenzidine, צלחות נקראו עם קורא Tecan Infinite 200 (Tecan, Giessen , הולנד). בנוסף לבקרות שסיפק היצרן, סרום חמוס שליטה שלילי וסרום אנושי עם שליטה חיובית שימשו כבקרות. הבדל פרופורציונאלי בערך הצפיפות האופטית (OD) בין מדגם לשליטה שלילית ב- π.6 פורש כחיובי כפי שצוין על ידי היצרן.

כדי לבדוק האם הנוגדן החד-שבטי מסוגל להיקשר ל- NP הקיים על פני השטח של תאים נגועים בנגיף שפעת A, A549 אדנוקרצינומה תאי אפיתל בסיסיים מכתיים אנושיים, וירוס אפשטיין-בר (EBV), וכלב מדין-דרבי. תאי כליה (MDCK) חוסנו בנגיף שפעת A (H3N2) RESVIR-9 עם ריבוי זיהום (MOI) של וירוס 3. שפעת A (H3N2) RESVIR-9 הוא זן חיסון נגד שפעת המתקבל לאחר מבצע מחדש בין וירוס שפעת A/ Nanchang/933/95 (HA, NA, NP) ונגיף השפעת A/PR/8/34 (חמשת מקטעי הגנים הנותרים). לאחר הדגירה במשך 16 עד 18 שעות ב 37 ଌ עם 5% CO2, תאים נוספו טריפסינים ולאחר מכן הודגרו במשך 30 דקות עם 10, 20, ו 40 μg/ml של MoAb NP או שליטה איזוטיפית (BD, Alphen a/d Rijn, הולנד) ב- 4 ଌ. לאחר הכביסה, התאים הוכתמו ב- MoAb עם תווית פלואורסצין איזוטיוציאנט (FITC) המכוון נגד IgG אנושי (דקו, גלוסטרופ, דנמרק). לאחר מכן, תאים תוקנו עם Cytofix (BD, Alphen a/d Rijn, הולנד) ולאחר מכן הוערכו על ידי cytometry זרימה עם ציטומטר FACSCanto II. הנתונים נותחו בעזרת תוכנת FACSDiva (BD, Alphen a/d Rijn, הולנד). כל הניסויים בוצעו בשני עותקים, ותאים לא נגועים שימשו כבקרות שליליות. כפי שמוצג באיור 1, MoAb NP נקשר לתאים הנגועים בנגיף מכל שלושת שורות התאים, בעוד שלא נצפתה קישור לתאי בקרה לא נגועים. בנוסף, כמעט ולא נצפתה קישור של נוגדני השליטה באיזוטיפ (איור 1 א). בנוסף, ניסויי קורס הזמן הצביעו על כך שכבר ניתן לזהות NP על פני השטח של תאים נגועים תוך שעה אחת לאחר החיסון (הנתונים אינם מוצגים), מה שמרמז על קישור ה- NP החופשי הנמצא בחיסון. ממצאים אלה מאשרים את הממצאים שהושגו במקור על ידי Yewdell et al., שהראו את נוכחותם של NP על פני השטח של תאי P815 נגועים באמצעות NP MoAb ממוצא עכברי (15).

זיהוי נגיף שפעת A על פני השטח של תאי A549 נגועים בנגיף שפעת, תאי B ותאי MDCK על ידי MoAb NP. תאים נדבקו בנגיף שפעת RESVIR-9 (H3N2) ב- MOI של 3 (לבן) או לא נדבקו (אפור) ולאחר 16 עד 18 שעות של דגירה לאחר מכן הודגרו עם MoAb NP או נוגדן שליטה איזוטיפ (20 μg/ml ) כפי שצוין, והקשר של נוגדנים אלה הוערך לאחר הדגירה לאחר מכן עם MoAb שכותרתו ב- FITC מכוונת נגד IgG אנושי על ידי ציטומטריה של זרימה (A) או מיקרוסקופיה קונפוקלית (B).

בנוסף, הלוקליזציה הסלולרית של NP בתאי A549 נגועים בנגיף נותחה על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית באמצעות מיקרוסקופ Zeiss LSM700 בשילוב עם תוכנת Zeiss LSM Zen 2010 (Carl Zeiss, Sliedrecht, הולנד). נעשה שימוש באותו הליך המתואר לציטומטריה של זרימה, פרט לכך שתאים הודגרו גם עם PKH-26 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) כדי לדמיין ממברנות סלולריות. גם בשיטה זו נצפתה קשירה של MoAb NP ל- NP תאיים על תאים נגועים בנגיף, בעוד שכמעט לא נצפתה מחייבות עם הפקד איזוטיפ (איור 1 ב). מעניין, הכריכה של MoAb NP ל- NP לא הופצה באופן שווה על פני כל התא, אלא הציגה דפוס מטושטש, שהוא בהתאם לתבנית של מכתים NP של תאי עכבר נגועים עם נוגדן חד -שבטי עכבר ספציפי ל- NP (15). פרמביליזציה של התאים הנגועים לפני הדגירה עם הנוגדן הספציפי ל- NP הביאה למכתם הגרעיני והציטופלסמי הטיפוסי של NP, וגם בתאים אלה, נצפתה קישור של MoAb NP על פני התאים (הנתונים לא מוצגים).

כדי להעריך את היקף התגובתיות של MoAb NP, תאי A549 חוסנו בנגיפי שפעת A/פורטו ריקו/8/1934 (H1N1), A/חזירים/הולנד/25/1980 (H1N1), A/הולנד/246/2008 (H1N1), A/הולנד/602/2009 (H1N1pdm09), A/הונג קונג/2/1968 (H3N2) ו- A/הולנד/348/2007 (H3N2) ונגיפי שפעת B/הולנד/151/2001 (ויקטוריה שושלת) ו- B/הולנד/080/2002 (שושלת יאמאגאטה) ב- MOI של 3 ולאחר מכן נבדקו על ידי cytometry זרימה כמתואר לעיל. MoAbs שכותרתו ב- FITC מכוונת נגד ה- NP של וירוס שפעת A או שפעת B (בדיקת אימונו-קרינה של Imagen Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) שימשו כבקרות חיוביות.

קשירת ה- MoAb NP נצפתה לתאים הנגועים בכל נגיפי שפעת A אך לא לאלה הנגועים בנגיפי שפעת B. זה מאשר את התגובתיות הרחבה של נוגדן זה לנגיפי שפעת A. עם זאת, הבדלים נצפו במידת הקישור, אשר עשוי לנבוע מהבדלים בביולוגיה של זיהום או בשל הבדלים בזיקה של הנוגדן ל- NPs בהתאמה (איור 2) (20, 21).

זיהוי נגיף שפעת NP על פני השטח של תאי A549 הנגועים בנגיפי שפעת A ו- B שונים. תאים נדבקו בנגיפי שפעת שונים ב- MOI של 3 ודגרו במשך 16 עד 18 שעות. לאחר מכן, תאים הודגרו עם MoAb NP (לבן) או נוגדן בקרת איזוטיפים (אפור 20 μg/ml), והקשר של נוגדנים אלה הוערך לאחר הדגירה לאחר מכן עם MoAb שכותרתו FITC מכוונת נגד IgG אנושי על ידי ציטומטריה של זרימה.

למרות שה- MoAb NP מגיב באופן צולב מאוד ויכול להיקשר לתאים הנגועים בנגיף, תפקידו של MoAb ספציפי ל- NP בחסינות נגד שפעת נותר חמקמק. לכן, ביצענו בַּמַבחֵנָה ניסויים להערכת תפקידים אפשריים של NP MoAb בחסינות מפני נגיף שפעת A.

ראשית, היכולת לנטרול הנגיפים של ה- MoAb NP נבדקה באמצעות מבחן הפחתת הזיהום עם נגיפי שפעת A RESVIR-9 (H3N2) ו- A/PR/8/34 (H1N1) כפי שתואר לעיל (22). שימוש במבחן זה, הרגיש יותר ממבחן ניטרול הנגיפים הקונבנציונאלי (22), לא נצפתה הפחתה בזיהום באמצעות 2.5, 5.0, 10.0, ו 20.0 μg/ml של MoAb NP בניגוד לסרת חמוס לאחר הזיהום שהועלתה כנגד זנים הומולוגיים ששימשו כבקרות חיוביות. ממצאים אלה מצביעים על כך ש- MoAb ספציפי ל- NP אינו מסוגל למנוע הידבקות של תאים, דבר המאשר תוצאות קודמות שהתקבלו עם נוגדנים חד שבטיים עכבריים ספציפיים ל- NP (איור 3 א) (15).

פעילות אימונולוגית של MoAb ספציפי ל- NP אנושי בַּמַבחֵנָה. (א) הפעילות המנטרלת וירוסים של MoAb NP נגד וירוס שפעת A/PR/8/34 (H1N1, פסים שחורים) או RESVIR-9 (H3N2, פסים אפורים) נבדקה באמצעות מבחן הפחתת זיהומיות כפי שתואר לעיל (22) בריכוזים שונים כפי שצוין. לא נצפתה פעילות מנטרלת וירוסים, בניגוד לשימוש בסרום חמוס פוסט-זיהום הומולוגי. (ב) MoAb NP לא תיווך ציטוטוקסיות תלויית תלות של תאים A549 (ברים אפורים), בניגוד לתכשיר נוגדן IgG המתקבל מסרום אנושי עם פעילות HI נגד הנגיף המשמש (RESVIR-9 [H3N2]) (ברים לבנים) . מכיוון שנעשה שימוש בכמויות מקבילות ל- IgG האנושי (Hu) ול- MoAb NP, הריכוז של MoAb NP (μg/ml) מצוין או ריבוי נפח ה- IgG האנושי שהצליח למנוע hemagglutination של 4 יחידות המגלוטינין כפי שנמדד במבחן HI (יחידות HI [U]/מיליליטר) מצוין על איקס צִיר. (C ו- D) הפעלה של תאי CD8 + T ספציפיים לנגיפים (שיבוט תא CD8 + T ספציפי ל- HLA-B*3501 מוגבל האפיטופ NP418 � . מסומנים ערכים ממוצעים ± סטיות תקן. לנוכחות MoAb NP לא הייתה השפעה על הפעלת ה- NP418 �-תאי CD8 + T ספציפיים.

שנית, בדקנו האם MoAb נגד NP יכול לתווך ציטוטוקסיות סלולרית תלויית משלים (CDCC) כפי שתואר לעיל עבור נוגדנים כנגד חלבון המטריצה ​​2 והאזור השמור של חלבון הגבעול של המגלוטינין (10, 23). לשם כך, תאי A549 נדבקו בנגיף שפעת A RESVIR-9 (H3N2) ב- MOI של 3 ו -30,000 תאים הודגרו לבאר של צלחת 96-בארות תחתונה במשך 3 שעות ב 37 ଌ באווירה לחה. של 5% CO2. נעשה שימוש במרווח של 3 שעות מכיוון שהוכח בניסויי פיילוט כי ההכרה ב- NP על פני התאים הגיעה לרמה תוך 3 שעות לאחר החיסון ומשך ההדבקה הקצר יחסית הביא למספר הגבוה ביותר של תאים חיים עם NP על השטח. לאחר מכן, תאים הודגרו עם 0, 20 או 40 μg/ml של MoAb NP למשך 30 דקות במדיום RPMI ללא פנול המכיל 5% סרום עגל עוברי, 100 IU/מיליליטר פניצילין, 100 μg/ml סטרפטומיצין, 2 מ"מ גלוטמין ו- 20 μM β-mercaptoethanol. כבקרה חיובית, השתמשנו ב- IgG מטוהר של תורם אנושי בו הודגמה נוכחות נוגדנים כנגד המגלוטינין של נגיף RESVIR-9 באמצעות מבחן עיכוב ההמגלוטינציה (HI) (כותרת HI של 40). לאחר מכן, נוספה 1: 20 מדולל, שושלת ניסיונות דלת טוקס (Cedarlane, ברלינגטון, אונטריו, קנדה), ולאחר דגירה במשך שעתיים נקבעה תמוגה תלויי תלות של השלמה באמצעות מבחן הציטוטוקסיות הלא רדיואקטיבי Cytotox 96 (Promega , ליידן, הולנד) על פי המלצות היצרן. כל הניסויים בוצעו בכפולות, ותאים לא נגועים שימשו כבקרות שליליות. תמוגה ספציפית לנוגדנים חושבה על ידי הפחתת תמוגה הספציפית הנמדדת לתאים לא נגועים מאחוז התמוגה הספציפי של תאים נגועים. אחוז תמוגה ספציפית חושב באמצעות הנוסחה הבאה: (תמוגה % על ידי נוגדנים ומשלים − תמוגה לפי השלמה בלבד)/( % תמוגה מקסימלית ותמוגה#x02212 % לפי השלמה). גם במבחן זה, לא נצפתה פעילות של ה- MoAb NP למרות השימוש בריכוזי נוגדנים גבוהים של MoAb NP, בניגוד לנפחים מקבילים של ה- IgG בשליטה חיובית (איור 3 ב). ממצאים אלה מצביעים על כך שנוגדן זה ל- NP אינו מתווך CDCC, בניגוד לנוגדנים כנגד המגלוטינין או חלבון מטריצה ​​2 (10, 23). סביר להניח שההבדלים מוסברים בכך שהמגלוטינין וחלבון מטריצה ​​2 מעוגנים בקרום התא, בעוד שזה לא הוכח וסביר להניח שזה לא המקרה של הנוקלאופרוטאין. מעניין, יוודל ועמיתיו צפו ברמות נמוכות של CDCC באמצעות MoAb עכברי המכוון נגד ה- NP, בניגוד לתצפיות שלנו (15). זה עשוי להיות קשור להבדלים בין מבחני השימוש או ה- MoAb NP בשימוש.

הוצע כי ניתן לייחס את האפקט המגן של נוגדנים ספציפיים ל- NP הנצפים בעכברים להיווצרות קומפלקסים חיסוניים המעובדים על ידי תאים המציגים אנטיגן, וכתוצאה מכך מגיבים מואצים ומשופרים לתגובות תאי CD8 + T ספציפיים לנגיפים. אכן לא נצפתה הגנה בהעדר תאי T זיכרון (14, 24). לכן, רצינו לחקור את ההשפעה של MoAb NP על אופסוניזציה של אנטיגן ויראלי, מה שאולי יוביל לשיפור ספיגה, עיבוד והצגת אנטיגן לתאי CD8 + T ספציפיים לנגיפים על ידי תאים מקצועיים המציגים אנטיגן. כדי לבדוק את אופן הפעולה האפשרי הזה, ייצר תכשיר ויריון מפוצל של נגיף שפעת A RESVIR-9 על ידי טיפול במניות וירוסים מרוכזות ומטוהרות באמצעות דקנויל-נ-מתילגלוקמיד (Mega-10 Sigma-Aldrich, Zwijndrecht, הולנד) למשך 30 דקות. לאחר דיאליזה נגד תמיסת מלח שנאגרה בפוספט (PBS) למשך 24 שעות, ריכוז החלבון נקבע באמצעות ערכת assay חלבון BCA (מוצרי Thermo Scientific Pierce Protein Biology, Rockford, IL) וחוסר הפעלה מלאה של הנגיף אושר כמתואר לעיל ( 25). כמות 0-, 0.5- או 1-μg של התכשיר המפוצל של וירון הודגרה עם או בלי 1 μg MoAb NP במשך שעה אחת ב 37 ଌ ולאחר מכן נוספה ל -100,000 תאים דנדריטים הנגזרים ממונוציטים (DC ) מתורמי HLA-B*3501 +, שהוכנו כמתואר לעיל עם מונוציטים שמקורם בשני תורמי דם בריאים שונים (26). לאחר דגירה של DC עם אנטיגן ועם או בלי MoAb NP במשך 16 עד 18 שעות ב- 37 ଌ, 30,000 תאים של שיבוט תא CD8 + T ספציפי ל- HLA-B*3501 מוגבל אפיטופ NP418-426 (LPFEKSTVM) (27) נוספו. לאחר הדגירה במשך 6 שעות בנוכחות Golgistop (BD, Alphen a/d Rijn, הולנד), ייצור אינטרפרון גמא (IFN-γ) על ידי תאים של שיבוט התא CD8 + T הוערך על ידי cytometry זרימה באמצעות ציטומטר FACSCanto II. הנתונים נותחו על ידי תוכנת FACSDiva למעשה כפי שתואר לעיל, וייצור ספציפי של IFN-γ חושב על ידי הפחתת אחוז תאי IFN-γ + T של פקדים בינוניים מה- DC מודגרות עם ההכנה המפוצלת virion (28 ). גירוי של תאי CD8 + T ספציפיים ל- NP עם תאים דנדריטים שנדגרו עם הכנת ה virion המפוצלת גרמה לייצור IFN-γ. עם זאת, דגירה מוקדמת של התכשיר האנטיגן המפוצל virion עם MoAb NP לא הגדילה את אחוז תאי T המייצרים IFN γ (איור 3C ו-#x200B ו- D). ד). ממצאים אלה מצביעים על כך ש- MoAb NP זה אינו משפר קליטה, עיבוד והצגת אנטיגן לתאי CD8 + T ספציפיים לנגיפים על ידי DC בַּמַבחֵנָה. בנוסף, לא נצפתה עלייה ברגולציה של מולקולות קוסטימולציה CD80, CD83 ו- CD86 לאחר הדגירה של DC עם virion מפוצל ו- MoAb NP בהשוואה ל- DC שהודגרה עם הכנת ה virion המפוצלת בלבד (הנתונים אינם מוצגים). עם זאת, MoAb NP עשויה לשפר את האנדוציטוזה וההצגה באמצעות מולקולת המחלקה II (MHC) המורכבת העיקרית לתאי CD4 + T. יחד, הוכחנו כי MoAb NP נקשר לנוקלאופרוטאין ויראלי על פני תאים הנגועים בנגיף, אך לא הצלחנו להוכיח פעילות ביולוגית בעלת חשיבות אימונולוגית עבור נוגדן אנושי זה המופנה ל- NP במגוון רחב בַּמַבחֵנָה מערכות בדיקה.

עדיין לא ידוע מה המקור המדויק ודרך הסחר של NP וכתוצאה מכך המראה הטלאי על פני השטח של תאים נגועים בנגיף. במחקרי פיילוט באמצעות נוגדן חד-שבט עכבר ספציפי ל- NP, ראינו כי NP כבר ניתן לזיהוי על פני השטח של תאים נגועים תוך שעה לאחר החיסון. יתר על כן, לא הצלחנו למנוע הופעה זו על ידי שימוש במעכב העברת החלבונים ברפלדין A, דבר המצביע על כך שלא מדובר בתהליך פעיל, שכבר הוצע בעבר (15). יתכן, NP המזוהה על פני התא נרכש לאחר שחרורו על ידי תאים נגועים אחרים בנגיף או מצטבר מהחיסון הנגיפי.

כמובן, ה בַּמַבחֵנָה מערכות הבדיקה המשמשות כאן אינן משקפות את המצב in vivo. בנוסף, ההשפעה הביולוגית של נוגדנים ספציפיים ל- NP עשויה להיות תלויה באפיטופים המוכרים, ויש לבדוק נוגדנים נוספים נגד ה- NP כדי לטפל בבעיה זו. יתר על כן, האזור הקבוע בשרשרת הכבדה של MoAb של המחקר הנוכחי היה של תת -המחלקה IgG1, שאולי אינה זהה לאלה של הנוגדן המקורי. עם זאת, IgG1, שהיא תת -המחלקה הנפוצה ביותר, מסוגלת להפעיל את המשלים ולהיקשר לקולטני Fc בתאים שונים של המערכת החיסונית (29, 30). עם זאת, לא ניתן להוציא מכלל כי תת -סוגים אחרים עשויים להציג פעילות ביולוגית שונה, ולכן. יש לבדוק עוד סוגים נוספים. לפיכך, נוגדנים כנגד נוקלאופרוטאין נגיף שפעת A עדיין עשויים למלא תפקיד בחסינות הטרוסובטיפית, למשל על ידי שיתוף פעולה עם תאי T לחיסול תאים הנגועים בנגיף בריאה (14). יש צורך במחקר נוסף על מנת להתמודד עם הפוטנציאל של נוגדנים ספציפיים ל- NP להרשות חסינות הטרו-סובטיפטית בבני אדם, להבהיר את תרומתם היחסית לחסינות מסוג זה ולהבהיר את מנגנוני ההגנה.


מַשׁלִים

העורכים שלנו יבדקו את מה שהגשת ויחליטו אם לשנות את המאמר.

מַשׁלִים, באימונולוגיה, מערכת מורכבת של יותר מ -30 חלבונים הפועלים יחד כדי לסייע בחיסול מיקרואורגניזמים זיהומיים. Specifically, the complement system causes the lysis (bursting) of foreign and infected cells, the phagocytosis (ingestion) of foreign particles and cell debris, and the inflammation of surrounding tissue.

The interacting proteins of the complement system, which are produced mainly by the liver, circulate in the blood and extracellular fluid, primarily in an inactivated state. Not until the system receives an appropriate signal are they activated. The signal sets off a chemical chain reaction in which one activated complement protein triggers the activation of the next complement protein in the sequence.

Complement activation occurs by two routes, called the classical pathway and the alternative pathway, or properdin system. A different type of signal activates each pathway. The classical pathway is triggered by groups of antibodies bound to the surfaces of a microorganism, while the alternative pathway is spurred into action by molecules embedded in the surface membranes of invading microorganisms and does not require the presence of antibodies. Both pathways converge to activate the pivotal protein of the complement system, called C3.

The activation of C3 fragments the protein into two pieces—a smaller piece, called C3a, which promotes an inflammatory reaction, and a larger piece, called C3b, which binds to the surface of a microbial cell. C3b helps bring about the elimination of the microbial invader in two ways:

Complement was identified in the late 19th century as one of two soluble proteins in human blood serum responsible for killing bacteria, the other substance being antibody. The original complement protein was called alexin, but its name was eventually changed to indicate how the protein “complemented” the action of antibody in carrying out bacterial lysis. The classical pathway was characterized in the early part of the 20th century, prior to the discovery of the alternative pathway, which was described in the 1940s but not fully appreciated until the 1970s. Because antibodies are not needed to activate the alternative pathway—but are required to set off the classical cascade—the alternative pathway serves as a first defense against infection and is part of the nonspecific, innate immune response, which occurs before a specific, acquired immune response can be mounted. The alternative pathway appears to be the more primitive of the two systems, and the nomenclature, therefore, indicates the sequence of discovery of the two pathways and not their evolutionary history.


Understanding the Importance of Human IgG

Human IgG is a component of the immune system that protects the body from infection. It is the most abundantly found antibody isotype within the circulatory system of the human body. All antibody isotypes contain two heavy chains and two light chains that are arranged in a Y-shape. The IgG isotpye is found in blood, extracellular fluid, and colostrum among a wide variety of body fluids, and protects the fetus in utero because it is a small monomer capable of crossing the placenta.

It functions through multiple mechanisms: opsonization (coating pathogens for phagocytic uptake), activation of the complement signaling cascade, and toxin neutralization through binding. Human IgG antibody has been used to characterize novel classification algorithms for analyzing immunosignature data on complex microarrays in a highly reproducible manner (1). Using human IgG antibody, researchers were able to show that a Niave Bayes algorithm was more simple, robust, fast, and accurate than other widely used methods.

Novus Biologicals offers a wide selection of IgG, IgA, IgD, IgE, IgM and IgY products in the form of primary antibodies, secondary antibodies, isotype controls, kits and more.


What is Cell Mediated Immunity

Cell mediated immunity is the immunity mediated by antigen-specific T cells. T cells are produced in the bone marrow and are matured in the thymus. After they enter the bloodstream, T cells occur can be found in the blood as well as in lymphoid tissue. The antigens should be presented on the surface of the antigen-presenting cells (APCs) along with the major histocompatibility complexes (MHC). Once T cells encounter an antigen, they proliferate and differentiate into armed effector cells. The cytotoxic T cells destroy the infected cells by inducing apoptosis. T helper cells stimulate plasma B cells to produce antibodies.

Figure 2: Cell Mediated Immunity

The IgG and IgM are the main two types of antibodies produced by T helper cells in response to plasma B cells. The memory T cells are differentiated T cells, but their action requires the activation by the specific antigen. The major characteristic feature of the cell mediated immunity is that it destroys intracellular pathogens. The cell mediated immunity is shown in איור 2.


Opsonization

If the complement system in the sea urchin functions through multiple lectin and alternative pathways in the absence of the lytic functions of the terminal pathway, the major activity of this system is expected to be opsonization.

This work discovered a new form of Type I polysaccharide and produced evidence that complement played a catalytic-like part in the opsonization of bacteria by specific antibody.

Besides that, through cytokine-mediated interactions with B lymphocytes, the CD4 + T cells contribute to the generation of high-affinity IgG antibodies, which are able to perform bacterial opsonization and complement activation.

Besides that, through cytokine-mediated interactions with B lymphocytes, the CD4 + T cells contribute to the generation of high-affinity IgG antibodies, which are able to perform bacterial opsonization and complement activation.

The second mechanism is an opsonization process, involving the formation of immune complexes with ADAMTS13, which are subsequently cleared by phagocytes

We also theorize that physical and biological processes such as particle shape, size, coating and opsonization that affect MP clearance of debris and microbes can be harnessed to facilitate uptake of nanoparticles (NP) and tissue delivery.

Indeed, it is well known that opsonization of particles and microbes facilitates rapid uptake into monocytes and MDM.

To achieve the latter goal, we used a simple means, antibody opsonization, to facilitate uptake of particles into MP the process by which the host facilitates foreign particles for ingestion and destruction.

ה opsonization of foreign particles could facilitate the phagocytic process due to the interaction with Fc receptors highly expressed on the surface of monocytes

Moghimi SM, Szebeni J (2003) Stealth liposomes and long circulating nanoparticles: critical issues in pharmacokinetics, opsonization and protein-binding properties.


Immune tolerance

&ldquoWhy don&rsquot tens to hundreds of millions of B cells recognize and attack self-tissues?&rdquo

Antibodies recognize all types of antigens, except self-antigens. This feature is called &ldquoimmune tolerance.&rdquo B cells that react to self-antigens are generated, but are eliminated within the bone marrow. Even if some autoreactive B cells evade the elimination process and reach the periphery, those B cells that produce antibodies to self-antigens (autoantibodies) are inactivated by another mechanism including regulation by Tregs..

When these mechanisms are disrupted, &ldquoautoimmune disease&rdquo develops, characterized by immune cell-mediated self-tissue attack. Possible causes of autoimmune disease include viral infection, high fever, pregnancy, and the recently proposed abnormalities in the intestinal microbiome. However, the details of the mechanism remain unknown.